Descripción
El sistema permite realizar la síntesis de ADNc y la amplificación por PCR en el mismo tubo. Es ideal para la cuantificación altamente sensible de virus de ARN o ARN diana poco abundantes, así como estudios de expresión génica de alto rendimiento. También se ha optimizado para proporcionar eficacia, sensibilidad y especificidad de RT-PCR máximas en volúmenes de reacción reducidos y tiempos de ciclo rápidos.
Las mezclas de reacción One-step Fast se proporcionan como una solución concentrada 4X para permitir la adición de cantidades mayores de molde de ARN y mejorar la sensibilidad de detección con bajas concentraciones de muestra. La exclusiva formulación maximiza las actividades tanto de la transcriptasa inversa como de la ADN polimerasa Taq, a la vez que minimiza la posibilidad de formación de dímeros de cebadores y otros artefactos de PCR inespecíficos. Esto permite la amplificación conjunta sin sesgo de transcritos de bajo número de copias en presencia de genes de referencia con un mayor número de copias en aplicaciones de qRT-PCR dúplex.
La amplificación altamente específica es fundamental para el éxito de la qRT-PCR, ya que los productos inespecíficos pueden competir por la amplificación de la secuencia diana y alterar la eficacia de la PCR. Un componente clave de estos kits es la ADN polimerasa Taq AccuStart™ con anticuerpos monoclonales que se unen a la polimerasa y la mantienen inactiva durante la reacción de ensamblaje y la etapa de transcripción inversa a 50 °C. Una breve etapa de 30 segundos de activación por calor a 95 °C desnaturaliza irreversiblemente los anticuerpos, liberando la ADN polimerasa Taq sin modificar completamente activa. La rápida recuperación de la ADN polimerasa Taq sin modificar completamente activa es crucial para una eficiente cinética de la extensión. Por consiguiente, estos kits ofrecen mayor ahorro de reactivos y rendimiento en el laboratorio con respecto a los sistemas de qPCR convencionales o de rampa rápida.
ABI 7900HT/7900HT Fast/StepOnePlus™
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