Descripción
El kit de biotinilación de IgG (sulfhidrilo) HOOK™ está diseñado para la biotinilación eficiente de moléculas de IgG mediante la inmovilización de las moléculas de IgG sobre un soporte sólido (Figura 1).
Las moléculas de IgG contienen una región rica en histidina en su región Fc y esta característica se utiliza para inmovilizar primero las moléculas de IgG en un Resina quelante de níquel apoyo. A continuación, los enlaces disulfuro de la molécula de IgG inmovilizada se reducen con el Reductor™ de proteína-S-S, y el exceso de reductor simplemente se elimina. A continuación, la molécula de IgG inmovilizada reducida se incuba con PEG2-Solución de yodoacetil-biotina para biotinilar los grupos sulfhidrilo libres. El PEG gratuito2-La yodoacetil-biotina se elimina y la IgG biotinilada se eluye con un tampón que contiene imidazol. La biotinilación de la IgG en la resina quelante de níquel da como resultado la adición de 2-4 moléculas de biotina por molécula de IgG.
El kit de biotinilación (sulfhidrilo) de IgG HOOK™ ofrece una ventaja sobre las reacciones de biotinilación estándar, ya que la inmovilización a la resina quelante de níquel permite la eliminación rápida de la biotina desacoplada y, por lo tanto, elimina la necesidad de una mayor diálisis o desalinización del anticuerpo biotinilado.
La biotina, una molécula de 244 Dalton, exhibe una extraordinaria afinidad de unión por la avidina y la estreptavidina (Ka = 1015 M-1). Las moléculas biotiniladas se sondean eficientemente con avidina o estreptavidina conjugada con moléculas indicadoras, como peroxidasas o fosfatasas. El uso de proteínas marcadas con biotina en ELISA, Western blot y dot blot es una técnica popular.
El kit se suministra con una columna de quelación de níquel que se puede regenerar hasta 10 veces y nuestras alícuotas de un solo uso de CLAVIJA2-Yodoacetil-Biotina. CLAVIJA2-El yodoacetil-biotina es un reactivo de biotinilación reactivo al sulfhidrilo que reacciona con grupos tiol a pH 7,5-8,5 y forma enlaces tioéter estables. CLAVIJA2-El yodoacetil-biotina es soluble en agua, debido a su brazo espaciador de polietilenglicol (PEG). Para una reacción específica con sulfhidriles, limite la reacción a un pH de 7,5-8,5 y a la relación molar de yodoacetil-biotina a proteína, de modo que la concentración de biotina sea solo ligeramente superior a la concentración de sulfhidrilo. La reacción de yodoacetilo debe realizarse en la oscuridad para limitar la formación de yodo libre, que tiene el potencial de reaccionar con residuos de tirosina, triptófano e histidina.
La ventaja de utilizar un reactivo de biotinilación PEG (polietilenglicol) es que el largo brazo espaciador hidrofílico transmite su solubilidad en agua a la molécula a la que está acoplado. Esto significa que los anticuerpos y otras proteínas marcadas con nuestro PEG2-La yodoacetil-biotina tiene una menor ocurrencia de agregación en comparación con las reacciones de biotinilación sin PEG. El kit de biotinilación (sulfhidrilo) HOOK™ IgG está diseñado para el acoplamiento de 1-10 mg de proteína en tampón de 1 ml, adecuado para 8 acoplamientos.
También disponible: Biotinilación de IgG HOOK™ (Amina) para la biotinilación de aminas primarias.
Funciones
Biotinilación de anticuerpos más sencilla
La tecnología de soporte sólido elimina la limpieza de anticuerpos de diálisis/desalinización
Adecuado para anticuerpos de 1-10 mg
Reactivo de biotina PEG para reducir el obstáculo estérico y aumentar la solubilidad de los anticuerpos marcados
Aplicaciones
Para el marcaje eficiente y sencillo de anticuerpos con biotina
Valoraciones
No hay valoraciones aún.