Descripción
l kit de biotinilación de IgG (amina) HOOK™ está diseñado para la biotinilación eficiente de moléculas de IgG mediante la inmovilización de las moléculas de IgG sobre un soporte sólido (ver figura 1).
Las moléculas de IgG contienen una región rica en histidina en su región Fc y esta característica se utiliza para inmovilizar primero las moléculas de IgG en un Resina quelante de níquel apoyo. A continuación, la molécula de IgG inmovilizada se incuba con NHS-dPEG4-Biotina solución para biotinilar los grupos amina libres. El NHS-dPEG gratuito4-La biotina se elimina y la IgG biotinilada se eluye con un tampón que contiene imidazol. La biotinilación de la IgG en la resina quelante de níquel da como resultado la adición de 3-5 moléculas de biotina por molécula de IgG.
El kit de biotinilación (amina) de IgG HOOK™ ofrece una ventaja sobre las reacciones de biotinilación estándar, ya que la inmovilización a la resina quelante de níquel permite la eliminación rápida de la biotina desacoplada y, por lo tanto, elimina la necesidad de una mayor diálisis o desalinización del anticuerpo biotinilado.
La biotina, una molécula de 244 Dalton, exhibe una extraordinaria afinidad de unión por la avidina y la estreptavidina (Ka = 1015 M-1). Las moléculas biotiniladas se sondean eficientemente con avidina o estreptavidina conjugada con moléculas indicadoras, como peroxidasas o fosfatasas. El uso de proteínas marcadas con biotina en ELISA, Western blot y dot blot es una técnica popular.
El kit se suministra con una columna de quelación de níquel que se puede regenerar hasta 10 veces y nuestras alícuotas de un solo uso de NHS-dPEG4-Biotina (Ver Apéndice A para la estructura y reacción de acoplamiento). Los reactivos de biotinilación reactiva a aminas más utilizados son los ésteres de N-hidroxisuccinimida (NHS) insolubles en agua o los ésteres de N-hidroxisulfosuccinimida (sulfo-NHS) solubles en agua. La adición de un sulfonato cargado (SO3-) en el anillo de N-hidroxisuccinimida de los ésteres de sulfo-NHS da como resultado su solubilidad en agua (~10 mM), pero no permeable a las membranas plasmáticas. La solubilidad e impermeabilidad de las membranas plasmáticas las hace ideales para estudiar las proteínas de la superficie celular, ya que solo reaccionarán con las moléculas de proteínas en la superficie externa de las membranas plasmáticas. Las reacciones de los ésteres del NHS y del sulfo-NHS con las aminas son prácticamente idénticas, lo que lleva a la formación de un enlace amida y a la liberación del NHS o sulfo-NHS.
La ventaja de utilizar un reactivo de biotinilación PEG (polietilenglicol) es que el largo brazo espaciador hidrofílico transmite su solubilidad en agua a la molécula a la que está acoplado. Esto significa que los anticuerpos y otras proteínas marcadas con nuestro NHS-dPEG4-La biotina tiene una menor ocurrencia de agregación en comparación con las reacciones de biotinilación sin PEG. El kit de biotinilación (amina) HOOK™ IgG está diseñado para el acoplamiento de 1-10 mg de proteína en tampón de 1 ml, adecuado para 8 acoplamientos.
También disponible: Biotinilación de IgG HOOK™ (sulfhidrilo) para la reducción parcial y biotinilación de residuos libres de sulfhidrilo.
Funciones
Biotinilación de anticuerpos más sencilla
La tecnología de soporte sólido elimina la limpieza de anticuerpos de diálisis/desalinización
Adecuado para anticuerpos de 1-10 mg
Reactivo de biotina PEG para reducir el obstáculo estérico y aumentar la solubilidad de los anticuerpos marcados
Aplicaciones
Para el marcaje eficiente y sencillo de anticuerpos con biotina
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