Descripción
El ensayo de β-galactosidasa (CPRG) proporciona un método fácil, rápido y altamente sensible para determinar la actividad de la β-galactosidasa en los lisados de células transfectadas con un constructo de expresión de β-galactosidasa. El ensayo de β-galactosidasa (CPRG) utiliza clorofenol rojo-β-D-galactopiranósido (CPRG), que es hasta 10 veces más sensible que los ensayos clásicos de o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido (ONPG) β-galactosidasa. Este aumento de la sensibilidad facilita la medición de la actividad de la β-galactosidasa en células que son difíciles de transfectar o que tienen una baja expresión de la actividad de la β-galactosidasa.
La β-galactosidasa cataliza la hidrólisis del análogo del galactósido clorofenol rojo-β-D-galactopiranósido (CPRG). Los lisados celulares se incuban con los reactivos suministrados y la β-galactosidasa convierte el sustrato de CPRG amarillo-anaranjado en el rojo cromóforo rojo clorofenol, produciendo una solución de color rojo oscuro. El gen de la β-galactosidasa funciona bien como gen reportero porque el producto proteico es extremadamente estable, resistente a la degradación proteolítica en lisados celulares y fácil de analizar. Los niveles de actividad β-expresión de galactosidasa se pueden medir rápidamente con este método.
La actividad de la β-galactosidasa se mide utilizando un espectrofotómetro o un lector de microplacas para determinar la cantidad de sustrato convertido a 570-595 nm. Aunque el kit de ensayo de β-galactosidasa CPRG proporciona todos los reactivos necesarios para 500 microensayos en una placa de 96 pocillos, se adapta fácilmente a diferentes tamaños de ensayo.
Funciones
Ensayo colorimétrico
~ 10 veces más sensible que los ensayos ONPG
500 ensayos de micropocillos
Escalable
Aplicaciones
Controlar los niveles de transfección en las células
Valoraciones
No hay valoraciones aún.